Плазмида как вектор клонирования

В этой лекции по клонированию ДНК объясняется использование плазмиды в качестве вектора клонирования. http://shomusbiology.weebly.com/ Загрузите учебные материалы здесь: http://shomusbiology.weebly.com/bio-m... Вектор клонирования — это небольшой фрагмент ДНК, взятый из вируса, плазмиды или клетки высшего организма, который может стабильно поддерживаться в организме и в который можно вставить чужеродный фрагмент ДНК для целей клонирования.[1] Таким образом, вектор содержит элементы, позволяющие удобно вставлять или удалять фрагмент ДНК из вектора, например, путем обработки вектора и чужеродной ДНК рестрикционным ферментом, создающим одинаковый выступающий конец, а затем лигирования фрагментов вместе. После клонирования фрагмента ДНК в вектор клонирования его можно дополнительно субклонировать в другой вектор, предназначенный для более специфического использования. Существует множество типов векторов клонирования, но наиболее часто используются генетически модифицированные плазмиды. Клонирование обычно сначала проводят с использованием Escherichia coli, и в качестве векторов клонирования в E. coli используются плазмиды, бактериофаги (например, фаг λ), космиды и бактериальные искусственные хромосомы (BAC). Однако некоторые фрагменты ДНК не могут стабильно поддерживаться в E. coli, например, очень большие фрагменты ДНК, и в этом случае могут использоваться другие организмы, такие как дрожжи. В качестве векторов клонирования в дрожжах используются дрожжевые искусственные хромосомы (YAC). Плазмида — это автономно реплицирующаяся кольцевая внехромосомная ДНК. Это стандартные и наиболее часто используемые векторы клонирования. Большинство универсальных плазмид могут использоваться для клонирования ДНК-вставок размером до 15 кб. Одним из первых широко используемых векторов клонирования является плазмида pBR322. Другие векторы клонирования включают серию плазмид pUC, и существует большое количество различных плазмидных векторов клонирования. Многие плазмиды имеют высокое число копий, например, pUC19, которая имеет число копий 500-700 на клетку[13], и высокое число копий полезно, поскольку оно обеспечивает больший выход рекомбинантной плазмиды для последующих манипуляций. Однако плазмиды с низким числом копий могут быть предпочтительнее в определенных обстоятельствах, например, когда белок клонированного гена токсичен для клеток[14]. Некоторые плазмиды содержат точку начала репликации бактериофага M13 и могут использоваться для генерации одноцепочечной ДНК. Они называются фагемидами, и примерами являются векторы клонирования серии pBluescript. Источник статьи, опубликованной в описании, — Википедия. Я делюсь их материалом. Авторские права принадлежат разработчикам оригинального контента Википедии. Ссылка: http://en.wikipedia.org/wiki/Main_Page