Затухание пиков в ВЭЖХ | Устранение неполадок в ВЭЖХ | Проблема с пиками в ВЭЖХ | #ВЭЖХ l AS rese...

Присоединяйтесь к этому каналу, чтобы получить доступ к бонусам:    / @asalok   На этом канале будут проводиться практические занятия в прямом эфире. Нажмите, чтобы посмотреть другие видео. Хвостовое искажение пиков — наиболее распространенное искажение формы хроматографических пиков. Мы хотим обсудить, как исправить эти искажения, но сначала давайте разберемся, что вызывает хвостовое искажение пиков. Хвостовое искажение пиков происходит, когда коэффициент асимметрии пика (As) превышает 1,2 — хотя пики с As больше 1,5 приемлемы для многих анализов. Основной причиной хвостового искажения пиков является наличие более чем одного механизма удерживания аналита. В обращенно-фазовых разделениях удерживание аналита обычно достигается за счет неспецифических гидрофобных взаимодействий со стационарной фазой. Однако также распространены полярные взаимодействия с любыми ионизированными остаточными силанольными группами, находящимися на поверхности силикагелевой подложки. Соединения, содержащие аминные и другие основные функциональные группы, сильно взаимодействуют с такими ионизированными силанольными группами, вызывая образование «хвоста» пиков. Это показано на рисунке ниже при pH подвижной фазы. Вторичные взаимодействия аналита с ионизированными силанольными группами на поверхности силикагеля приводят к образованию «хвоста» пиков. Эти взаимодействия необходимо минимизировать для достижения приемлемой формы пиков. Как избежать образования «хвоста» пиков Существует несколько методов, которые можно использовать для предотвращения образования «хвоста» пиков: Работа при более низком pH Использование сильно деактивированной колонки Учет возможности массовой перегрузки Учет возможности деформации слоя колонки Работа при высоком pH при анализе основных соединений Использование процедуры очистки образца Если вам нужна помощь в выборе подходящей колонки, то наше руководство по выбору колонок для ВЭЖХ вам поможет. Проведение хроматографии при более низком pH Поскольку силанольные группы являются кислыми, вторичные взаимодействия можно минимизировать, проводя хроматографическое разделение при более низком pH — тем самым обеспечивая полное протонирование таких ионизируемых остаточных силанольных групп. Конечно, это может привести к уменьшению времени удерживания, если в образце присутствуют ионизируемые основные аналиты, что может потребовать снижения содержания органического модификатора в подвижной фазе. Стандартный силикагель не следует использовать при pH ниже 3, так как это может вызвать растворение силикагеля. Пятикомпонентная смесь основных лекарственных соединений на приведенных ниже хроматограммах состоит из фенилпропаноламина, эфедрина, амфетамина, метамфетамина и фентермина (пики 1-5) соответственно. Первая хроматограмма была получена при pH подвижной фазы 7,0. В этих условиях разделения пик 4, метамфетамин, показывает значение As 2,35. Снижение pH подвижной фазы уменьшает основное взаимодействие аналита с остаточными силанольными группами, тем самым устраняя чрезмерное размывание пиков. Вторая хроматографическая кривая была получена при pH подвижной фазы 3,0, что снизило значение As метамфетамина в этих условиях разделения до 1,33. Используйте сильно деактивированную колонку. В качестве альтернативы можно использовать «колонку с концевой блокировкой». Концевая блокировка — это процесс, при котором остаточные силанольные группы обрабатываются для преобразования их в значительно менее полярные поверхностные функциональные группы. Это приводит к уменьшению количества вторичных взаимодействий, которые они потенциально могут иметь с полярными молекулами аналита. К химическим реагентам, обычно используемым в процессе концевой блокировки, относятся: Триметилхлорсилан (TMCS) Гексаметилдисилазан (HMDS) Концевая блокировка уменьшает размывание пиков, наблюдаемое для полярных соединений аналита, эффективно блокируя их взаимодействие с потенциально ионизируемыми остаточными силанольными группами. Однако, блокирование концов колонок уменьшает количество непрореагировавших остаточных силанольных групп лишь примерно на 50%. Из-за стерических препятствий такие реакции редко бывают очень эффективными в абсолютном выражении, и, следовательно, «полностью блокированная» колонка не совсем такая, какой может показаться! Колонки с сильно блокированными концами деактивированы и являются отличным выбором для разработки методов или общего лабораторного использования. Они обеспечивают симметричную форму пиков даже при работе с кислыми, щелочными и сильно полярными аналитами. Рассмотрите возможность массовой перегрузки. Если все хроматографические пики имеют хвосты, рассмотрите возможность массовой перегрузки колонки. Оцените это, просто разбавив образец в 10 раз и повторно оценив форму пиков на полученной хроматограмме. При необходимости используйте стационарную фазу с большей емкостью (например, с увеличенным содержанием углерода или размером пор), используйте колонку с увелич...