ИФА-тест: все типы и подробный разбор механизма действия : Микробиология

ИФА (иммуноферментный анализ) Различные типы ИФА и их принципы. Все типы ИФА-тестов. Иммуноферментный анализ (ИФА) (/ɪˈlaɪzə/, /ˌiːˈlaɪzə/) — широко используемый аналитический биохимический анализ, впервые описанный Энгваллом и Перлманом в 1971 году.[1] В этом анализе используется твердофазный ферментный иммуноанализ (ИФА) для обнаружения присутствия лиганда (обычно белка) в жидком образце с помощью антител, направленных против измеряемого белка. ИФА используется в качестве диагностического инструмента в медицине, фитопатологии и биотехнологии, а также для контроля качества в различных отраслях промышленности. В простейшей форме ИФА антигены из образца прикрепляются к поверхности. Затем на поверхность наносится соответствующее антитело, которое может связываться с антигеном. Это антитело связано с ферментом, и на заключительном этапе добавляется вещество, содержащее субстрат этого фермента. Последующая реакция дает обнаруживаемый сигнал, чаще всего изменение цвета. Проведение ИФА включает в себя как минимум одно антитело, специфичное для определенного антигена. Образец с неизвестным количеством антигена иммобилизуется на твердой подложке (обычно полистироловой микротитровальной пластине) либо неспецифически (путем адсорбции на поверхности), либо специфически (путем захвата другим антителом, специфичным для того же антигена, в «сэндвич-ИФА»). После иммобилизации антигена добавляется детектирующее антитело, образующее комплекс с антигеном. Детектирующее антитело может быть ковалентно связано с ферментом или само может быть обнаружено вторичным антителом, связанным с ферментом посредством биоконъюгации. Между каждым этапом пластина обычно промывается слабым раствором моющего средства для удаления любых неспецифически связанных белков или антител. После заключительного этапа промывки планшет обрабатывается путем добавления ферментативного субстрата для получения видимого сигнала, который указывает на количество антигена в образце. Следует отметить, что ELISA может выполнять и другие виды анализа связывания лигандов, помимо строго «иммуноанализа», хотя первоначальное название «иммуно» связано с распространенностью и историей развития этого метода. По сути, для этой методики требуется любой лигирующий реагент, который может быть иммобилизован на твердой фазе, а также реагент для обнаружения, который будет специфически связываться и использовать фермент для генерации сигнала, который можно правильно количественно определить. Между промывками только лиганд и его специфически связывающиеся аналоги остаются специфически связанными или «иммуносорбированными» за счет взаимодействия антиген-антитело с твердой фазой, в то время как неспецифические или несвязанные компоненты смываются. В отличие от других форматов спектрофотометрических лабораторных анализов, где одну и ту же реакционную лунку (например, кювету) можно использовать повторно после промывки, в планшетах для ИФА продукты реакции иммуносорбируются на твердой фазе, которая является частью планшета, поэтому их нелегко использовать повторно. Содержание 1 Принцип 2 История 3 Типы 3.1 Прямой ИФА[18] 3.2 Сэндвич-ИФА 3.3 Конкурентный ИФА 3.4 Обратный ИФА 4 Часто используемые ферментативные маркеры 5 Применение 6 См. также 7 Примечания и ссылки 8 Внешние ссылки