Как выполнить секвенирование BigDye? #Учебник

Секвенирование с использованием красителей (Big-Dye Sequencing) — это необходимый этап, на котором к очищенным ДНК-продуктам добавляют краситель. Эти красители связываются с нуклеотидами, поэтому секвенатор может распознавать последовательности, считывая окрашенные нуклеотиды. Перед использованием секвенатора необходим еще один этап. На этом этапе удаляются излишки красителей, оставшиеся после секвенирования с использованием красителей. Вот видеоинструкция по этому протоколу:    • How to Perform a Pre-Sequencing Bead Clean...   Следующий протокол: 1) Мастер-микс следует приготовить дважды: один раз с прямым праймером и один раз с обратным праймером, используя следующий рецепт для каждого образца: 6,00 мкл стерильной воды 2,25 мкл 5-кратного буфера для секвенирования Big Dye 0,25 мкл Big Dye Terminator V3.1 (это количество можно изменить в зависимости от длины последовательности. Например, 0,375 мкл — предпочтительное количество для MediumSeq, а 0,5 мкл — предпочтительное количество для LongSeq.) 0,50 мкл прямого/обратного праймера (эти праймеры использовались в ПЦР) 2) Приготовьте мастер-микс и добавьте ~9 мкл раствора мастер-микса в каждую пробирку с соответствующей маркировкой. 3) Добавьте 1 мкл продукта Post Exo-AP в пробирки с соответствующими этикетками. 4) Центрифугируйте пробирки. 5) Отнесите образцы в термоциклер и следуйте протоколу, показанному в видео. 6) Храните продукты Post Big-Dye при температуре 4 градуса Цельсия. Если у вас возникнут вопросы, оставьте комментарий.