3D-нейросферы из мультипотентных человеческих iPSC

Трехмерные (3D) модели тканей головного мозга человека, полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК), значительно продвинули изучение развития нервной системы человека и неврологических заболеваний in vitro. Хотя церебральные органоиды обладают высокой структурной сложностью, их большой размер часто приводит к образованию некротического ядра, что ограничивает воспроизводимость и затрудняет включение микроглии. В этом вебинаре мы представим подробный и воспроизводимый протокол для генерации многоклеточных 3D нейросфер человека, состоящих из нейронов и астроцитов, с возможностью добавления микроглии, полученной из ИПСК. Протокол основан на дифференцировке ИПСК в клетки-предшественники нейронов с использованием двойного ингибирования SMAD, за которым следует суспензионное культивирование для формирования нейросфер, которые предотвращают образование некротического ядра и поддерживают интенсивное созревание нейронов. Микроглия генерируется параллельно из той же линии ИПСК и может проникать в зрелые нейросферы, что позволяет проводить физиологически значимые исследования взаимодействия нейронов и глии. Система совместима с множеством последующих приложений, включая функциональную визуализацию спонтанной нейронной активности в реальном времени с использованием GCaMP6f и анализ на основе иммунофлуоресценции. Этот вебинар подчеркнет надежность, масштабируемость и воспроизводимость этой платформы нейросфер, которая успешно внедрена в нескольких лабораториях и применена для моделирования болезни Альцгеймера (БА).