Как анализировать данные ПЦР в реальном времени? | Расчёт кратности изменения экспрессии генов с ...

Анализ данных ПЦР в реальном времени и расчет изменения кратности | Метод ΔΔCt с использованием Excel и GraphPad Prism Запутались в ΔCt, ΔΔCt или расчете изменения кратности в ПЦР в реальном времени? Это пошаговое руководство объясняет, как анализировать данные экспрессии генов ПЦР в реальном времени с помощью Excel и GraphPad Prism, начиная с исходных значений Ct и заканчивая наглядными визуализациями, готовыми к публикации. Независимо от того, являетесь ли вы аспирантом, научным сотрудником, ученым или новичком в молекулярной биологии, это руководство предоставляет практическое объяснение метода 2^-ΔΔCt и его применения для анализа относительной экспрессии генов. 🧬 ЧТО ВЫ УЗНАЕТЕ В этом руководстве вы изучите полный рабочий процесс анализа относительной экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени: ✅ Расчет среднего значения Ct по техническим повторам ✅ Расчет ΔCt (ΔCt) ✅ Расчет ΔΔCt (ΔΔCt) ✅ Расчет изменения в кратности с использованием 2^-ΔΔCt ✅ Сравнение контрольной и экспериментальной групп ✅ Анализ данных qPCR с помощью Microsoft Excel ✅ Создание научных графиков с помощью GraphPad Prism ✅ Подготовка тепловых карт экспрессии генов ✅ Понимание рабочих процессов, применимых к анализам SYBR Green и TaqMan ✅ Работа с наборами данных, содержащими несколько контрольных образцов Файл данных, использованный для демонстрации: [Файл данных] [Ссылка](https://docs.google.com/spreadsheets/...) Добро пожаловать на мой канал «Учимся инновациям с Шаши Бхушаном Чауханом». В сегодняшнем видео мы углубимся в тонкости анализа данных ПЦР в реальном времени и расчета изменения экспрессии генов, упростив этот процесс как для исследователей, так и для студентов. В области молекулярной биологии ПЦР в реальном времени стала краеугольным камнем количественной оценки экспрессии генов. Однако интерпретация этих результатов часто может быть сложной, особенно при расчете данных об изменении экспрессии генов. Этот урок призван развеять эти трудности. Я покажу вам процесс расчета изменения уровня экспрессии генов на основе данных ПЦР в реальном времени, используя как Syber Green, так и Taqman-анализ. В этом видео рассматриваются распространенные трудности, с которыми сталкиваются многие студенты-исследователи, особенно при работе с несколькими контрольными образцами в своих исследованиях. В этом пошаговом руководстве я покажу вам, как рассчитать среднее значение CT, значение ΔCT, значение ΔΔCT и, наконец, изменение уровня экспрессии. Я продемонстрирую этот процесс с помощью Excel, что сделает его очень простым для понимания. Кроме того, я покажу, как визуально представить ваши данные с помощью графиков в Excel и программе GraphPad Prism, включая создание информативной тепловой карты. Файл данных, использованный для демонстрации: [Ссылка на файл данных](https://docs.google.com/spreadsheets/...) Это видео является частью серии, призванной сделать сложные научные процессы доступными и понятными. Поэтому, независимо от того, являетесь ли вы опытным исследователем или студентом, начинающим в этой области, этот урок будет полезен для вас. Если это видео оказалось для вас полезным, пожалуйста, поставьте лайк, поделитесь им и подпишитесь на канал, чтобы поддержать его. Спасибо за просмотр! Ключевые слова для поиска: #Как рассчитать изменение кратности для ПЦР в реальном времени #Рассчитать 2^-дельта-дельта Ct с помощью Excel #Как выполнить метод дельта-дельта Ct #Как рассчитать дельта-дельта Ct в Excel #Анализ данных ПЦР в реальном времени (qRT-PCR): метод ∆∆ct #Учебное пособие по анализу данных ПЦР в реальном времени #Учебное пособие по анализу данных ПЦР в реальном времени #Как анализировать данные ПЦР в реальном времени #Как анализировать данные ПЦР в реальном времени #Как анализировать данные ПЦР в реальном времени #Термины анализа ПЦР в реальном времени 🔬 ПОШАГОВЫЙ МЕТОД ΔΔCt 1️⃣ РАСЧЕТ СРЕДНЕГО ЗНАЧЕНИЯ Ct Узнайте, как рассчитать среднее значение Ct по техническим повторам и правильно организовать свой набор данных ПЦР в реальном времени. 2️⃣ РАСЧЕТ ΔCt ΔCt = Ct целевого гена − Ct референсного гена На этом этапе происходит нормализация целевого гена относительно эндогенного или референсного контрольного гена. 3️⃣ РАСЧЕТ ΔΔCt ΔΔCt = ΔCt образца − Среднее ΔCt контроля Это позволяет сравнивать уровень экспрессии генов в экспериментальных образцах с контрольной группой. 4️⃣ РАСЧЕТ ИЗМЕНЕНИЯ В РАЗМЕРЕ Изменение в размежевании = 2^-ΔΔCt 📈 КАК ИНТЕРПРЕТИРОВАТЬ ИЗМЕНЕНИЕ В РАЗМЕРЕ 📈 Изменение в размежевании больше 1 → Относительное повышение экспрессии 📉 Изменение в размежевании меньше 1 → Относительное снижение экспрессии ➖ Изменение в размежевании приблизительно равно 1 → Незначительное или нулевое относительное изменение Важно: Метод 2^-ΔΔCt основан на предположениях, связанных с эффективностью амплификации, стабил...